摘要：目的探讨微小RNA-1（miR-1）在高糖培养所致大鼠心肌纤维化中的作用途径。方法取1～3日龄SD大鼠心尖组织培养原代心肌成纤维细胞，传代至3～4代细胞后被随机分为正常糖空病毒组（CON＋ Lv-Vehicle组）、正常糖miR-1沉默组（CON＋Lv-miR1组）、高糖空病毒组（HG＋Lv-Vehicle组）、高糖miR-1沉默组（HG＋Lv-miR1组）、高糖空病毒抑制剂组（HG＋Lv-Vehicle＋CC组）、高糖miR-1沉默抑制剂组（HG＋Lv-miR1＋CC组）。将细胞分别置于葡萄糖5.5 mmol/L（正常糖）和25.0 mmol/L（高糖）的DMEM培养基中，接种含miR-1沉默序列的慢病毒载体或慢病毒；抑制剂组于取样前12 h加入20 μmol/L腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂Compound C。采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测磷酸化AMPK（p-AMPK）、胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ、基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）、自噬流相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ（LC3B-Ⅱ）、死骨片重组蛋白1（p62/SQSTM1）的蛋白表达。结果体外培养大鼠心肌成纤维细胞的纯度达97%。与CON＋Lv-Vehicle组比较，CON＋Lv-miR1组p-AMPK表达无明显变化，HG＋Lv-Vehicle组p-AMPK表达明显降低（p-AMPK/t-AMPK：44.72±3.29比100.00±7.77，P〈0.01）；HG＋Lv-miR1组p-AMPK表达较HG＋Lv-Vehicle组明显增高（p-AMPK/t-AMPK：60.52±5.16比44.72±3.29，P〈0.05）。与HG＋Lv-Vehicle组比较，HG＋Lv-miR1组胶原蛋白、MMP、LC3B-Ⅱ和p62/SQSTM1表达均明显降低；给予AMPK抑制剂后胶原蛋白、MMP、LC3B-Ⅱ、p62/SQSTM1表达均明显增高（HG＋Lv-Vehicle＋CC组与HG＋Lv-Vehicle组比较：胶原蛋白Ⅰ/β-actin为158.74±13.21比100.00±7.64，胶原蛋白Ⅲ/β-actin为177.38±17.31比100.00±5.18，MMP-2/β-actin为130.09±14.31比100.00±10.47，MMP-9/β-actin为215.54±20.92比100.00±11.28，LC3B-Ⅱ/β-actin为159.34±13.83比100.00±6.44，p62/SQSTM1/β-actin为201.01±24.02比100.00±8.62；HG＋Lv-miR1＋CC组与HG＋Lv-miR1组比较：胶原

关键词：腺苷酸活化蛋白激酶 心肌成纤维细胞 自噬 微小rna 纤维化 

单位：苏州大学附属第二医院麻醉科; 江苏苏州215004; 苏州大学; 江苏苏州215006; 苏州科技城医院临床医学研究所; 江苏苏州215153; 南京医科大学附属苏州医院麻醉及围术期医学科; 江苏苏州215153