摘要：目的探讨半乳糖凝集素- /T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3（Galectin-/Tim-3）信号通路在脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞M/2表型极化中的意义及分子机制。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7，待细胞生长至80%~90%时用于实验。①将细胞以无血清DMEM培养基培养，并分别以0（空白对照）、0.01、0.1、1、10、100 m/的LPS刺激24 h。采用荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）或蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测巨噬细胞M1型标志物白细胞介素- 6（IL-6）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和M2型标志物精氨酸酶-1（Arg-1）、白细胞分化抗原206（CD206）以及细胞内Tim-3、Galectin-9的表达。②另取小鼠腹腔巨噬细胞，并分为空白对照组（用无血清DMEM培养基培养24 h）、LPS处理组（用含0.1 m/的LPS无血清DMEM刺激24 h）和α-乳糖预处理组（在LPS刺激前1 h用含40 μmo/ Galectin-9信号拮抗剂α-乳糖的无血清DMEM进行预处理），通过封闭Galectin-9信号以验证Galectin-9在巨噬细胞M/2表型极化中的作用。结果①低浓度LPS（0.01 m/、0.1 m/）刺激24 h后，巨噬细胞M1型标志物的表达仅轻度上调（iNOS mRNA）或无明显变化（IL-6 mRNA）；而M2型标志物Arg-1 mRNA和CD206 mRNA表达则明显升高，并分别于0.1 m/和0.01 m/的LPS浓度下达到峰值〔与空白对照组比较：Arg-1 mRNA（2-ΔΔCt）为1.85±0.07比1.00±0.02，CD206 mRNA（2-ΔΔCt）为2.03±0.11比1.00±0.05，均P〈0.01〕；随LPS浓度升高，IL-6 mRNA和iNOS mRNA表达持续升高，而Arg-1 mRNA和CD206 mRNA表达则逐渐降低，巨噬细胞M/2表型极化状态发生改变。同时，经LPS刺激后，巨噬细胞内Tim-3蛋白表达在0.01 m/的LPS刺激后即较空白对照组明显上调（Tim-/APDH：0.84±0.04比0.69±0.02，P〈0.01），并在0.1 m/浓度下达峰值，之后随LPS浓度升高而逐渐下降；细胞内Galectin-9及上清中分泌型Galectin-9（s-Galectin-9）蛋白表�

关键词：脂多糖 巨噬细胞表型 极化 

单位：浙江大学医学院附属第一医院重症医学科; 浙江杭州310003