摘要：目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白 (GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究.方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RT段,插入原核表达质粒pET-28a(+);在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性.结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性.结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究.

关键词：蓖麻蛋白 蓖麻毒素a链 发光蛋白质类 基因表达 聚合酶链反应 

单位：浙江大学医学院; 生物化学与分子生物学教研室; 浙江; 杭州; 310006; 扬州大学医学院; 生物化学教研室; 江苏; 扬州; 225001; 浙江大学医学院; 生物化学与分子生物学教研室; 浙江; 杭州; 310006; 宁波大学医学院; 生物化学与分子生物学实验室; 浙江; 宁波; 315211; 浙江大学医学院; 生物化学与分子生物学教研室; 浙江; 杭州; 310006