摘要：目的：构建大鼠蛋白聚糖Ⅱ（DCN）重组腺病毒载体（Ad—DCN），鉴定其生物学活性。方法：用RT—PCR技术从大鼠肾脏组织mRNA中扩增获得全长DCN基因；将DCN基因克隆至腺病毒穿梭载体，与腺病毒骨架质粒在BJ5183-AD-1细菌中同源重组，并转染至Ad293细胞，扩增病毒后，用病毒空斑形成实验检测病毒滴度，并用MTT、RT—PCR、Western blot对其活性及表达情况进行鉴定。结果：本实验构建的Ad—DCN滴度可达1×10^9pfu·ml^-1,能在CHO细胞中高效表达具有生物学活性的DCN蛋白；表达产物能拮抗TGFβ1对CCL-64细胞增殖的抑制作用，TGFβ1表达产物DCN处理组细胞增殖率明显高于TGFβ1单独处理组和TGFβ1＋Ad—lacz处理组[（0．5252±0．04vs0．2826±0．02、0．2918±0．02）OD，P〈0．05]，但TGFβ1＋表达产物DCN处理组细胞增殖率仍低于未处理组[（0．9332±0．08）OD，P〈0．05]。结论：本实验构建的DCN重组腺病毒能高效表达具有生物学活性的DCN蛋白。

关键词：重组 遗传 转染 遗传载体 细胞 

单位：浙江大学医学院附属第一医院内分泌科; 浙江杭州310003