摘要：目的：构建肺炎链球菌ciaH和ciaR基因的原核表达系统，探讨ciaH和CiaR封闭后细菌耐药性变化。方法：采用PCR扩增全长ciaH和ciaR基因，以常规基因工程技术建立其原核表达系统。采用SDS—PAGE及Bio—Rad凝胶图象分析系统检测目的重组蛋白rCiaH和rCiaR表达量。制备rCiaH和rCiaR兔抗血清及其IgG。检测IgG胞外或胞内封闭肺炎链球菌菌株CiaH和CiaR后，细菌对青霉素和头孢噻肟耐药性的变化。结果：与报道序列比较，所克隆的ciaH和ciaR基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99．9％～100％和100%。所构建的工程菌E．coli BL21DE3^pET42A-ciaH和E．coli BL21DE3^pET42a-ciaR能高效表达目的重组蛋白rCiaH和rCiaR，其产量分别高达细菌总蛋白的33％和45％。rCiaH、rCiaR抗血清及其IgG免疫双扩散效价分别为1：4、1：4和1：1、1：1。CiaH—IgG胞外或胞内封闭CiaH、CiaR—IgG胞内封闭CiaR后，青霉素及头孢噻肟敏感菌株可出现对两种抗生素的耐药性，但对耐药菌株耐药性无明显影响。结论：成功地构建了肺炎链球菌ciaH／ciaR基因原核表达系统，为深入研究该TCS与耐药性关系奠定了基础。CiaH和CiaR均与肺炎链球菌对青霉素及头孢噻肟耐药性有关。

关键词：链球菌 基因 细菌 二元信号传导系统 耐药性 

单位：浙江医学高等专科学校 浙江杭州310053 浙江大学医学院病原生物学系 浙江杭州310058 浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科 浙江杭州310016 温州医学院附属第二医院检验科 浙江温州325000