摘要：目的：为探讨hoxd3基因在斑马鱼发育过程中与血管形成可能的作用机制,用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观测hoxd3基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达情况。方法：提取斑马鱼胚胎总RNA,经RT-PCR扩增斑马鱼hoxd3基因片段,将得到的hoxd3基因片段和pCS2＋质粒经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后插入pCS2＋质粒中,挑选阳性克隆,通过双酶切、菌落PCR以及测序鉴定;将pCS2＋-hoxd3重组子经EcoRⅠ酶切线性化,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记的hoxd3基因的反义mRNA探针。用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果：构建和鉴定了pCS2＋-hoxd3重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测hoxd3基因的表达,发现在Tuebingen野生型斑马鱼受精后24 h～72 h胚胎的中脑后脑交界处以及后脑中可以观察到hoxd3基因的表达。结论：hoxd3基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统高表达,未发现在血管生成区域的表达。

关键词：寡核苷酸类 原位杂交 基因表达 斑马鱼 胚胎发育 

单位：贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心; 贵州贵阳550004; 贵阳医学院免疫教研室; 贵州贵阳550004; 贵阳医学院儿科教研室; 贵州贵阳550004