摘要：目的：构建pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒,利用双分子荧光互补（BiFC）技术,在活细胞内直接观察趋化因子受体4（chemokine receptor 4、CXCR4和CD184）与CXCR4抑制性多肽的相互作用。方法：应用化学合成法获得巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ（viralmacrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ）N端21肽（N-terminal 21-mer peptide,NT21MP）编码的基因序列,克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VC155中,筛选含有目标基因的正确克隆。利用RT-PCR扩增人乳腺癌细胞株SKBR3的CXCR4全长基因后,T-A亚克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VN173载体中。然后,经酶切鉴定及DNA测序分析2个基因是否正确连接至真核表达载体中。应用脂质体转染的方法共转染pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VC155-CXCR4至细胞株COS-7中,在荧光显微镜下观察NT21MP与CXCR4在胞内的相互作用。结果：经DNA测序及同源性对比,证实pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VN173-CXCR4重组载体构建成功;基因片段与NCBI基因库vMIP-Ⅱ和CXCR4基因CDS序列同源性达99.9%。BiFC法观察NT21MP与CXCR4在细胞内结合出现的荧光信号,该信号分布细胞内。结论：本实验成功构建了应用BiFC技术的真核表达载体,并且在活细胞内检测到NT21MP与CXCR4的互相结合。

关键词：受体 趋化因子cxcl2 质粒 遗传载体 转染 

单位：蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心; 蚌埠医学院生化与分子生物学教研室; 蚌埠市中心医院普外肿瘤科; 安徽蚌埠233030