摘要：目的：观察D．半乳糖（D．galactose，D．gal）对骨髓间充质干细胞（MesenchymalStemCells，MSCs）衰老的影响，构建体外MSCs衰老诱导模型。方法：分离SD大鼠（7日龄）MSCs，传代培养至第3代后，细胞随机分为4组：分别为正常对照组，1g/L，10g/L和50g/LD—gal衰老诱导组。对照组在正常的DMEM培养液中继续培养；诱导组MSCs分别在含1g／L、10g/L、50g／LD—gal的DMEM培养液中培养48h。各组细胞培养结束后，衰老相关B．半乳糖苷酶染色法观察细胞衰老变化、Westernblot法检测衰老相关蛋白p53、p21和p16表达，AO／EB双染法检测细胞凋亡，MTT法检测细胞增殖，超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量检测细胞内氧化应激水平。结果：10g／L和50g／LD—gal诱导组衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数较对照组显著升高（P〈0．01），衰老相关蛋白p53、p21和p16表达明显增高：AO／EB染色结果显示50g/LD—gal诱导组细胞凋亡率较对照组显著升高（P〈0．01）；MTF检测结果表明lOg／L和50g／LD-gal均能抑制MSCs增殖活性，而10g/L和50g/LD．gal诱导组MSCs内SOD活力较对照组明显降低（P〈0．01），MDA含量显著升高（P〈0．01）。结论：10g/L和50g／LD—gal均可诱导MSCs发生衰老变化，并促使细胞内衰老相关蛋白p53、p21和p16表达增加，细胞存活能力减弱，增殖能力降低，这可能与D—gal促使MSCs内氧化应激水平升高有关。10g／L是D—gal诱导MSCs衰老的合适浓度。

关键词：半乳糖 间质干细胞 细胞衰老 骨髓 d一半乳糖 

单位：浙江大学城市学院医学院; 浙江杭州310015; 杭州市第二人民医院; 浙江杭州310015