摘要：目的探讨利用非变性聚丙烯凝胶电泳筛选TGF-β1特异性siRNA表达质粒。方法以高表达TGF—β1人肺腺癌细胞株A549为肿瘤细胞模型。应用Angela原则选择siRNA序列，12％非变性聚丙烯凝胶电泳筛选siRNA表达质粒并经测序后转染A549细胞，间接免疫荧光和免疫印迹法检测转染前后A549细胞中TGF-β1表达水平。结果经典分子克隆方法成功构建pOligo1210、pOligo1216、pOligo1363。12％非变性聚丙烯凝胶可以清晰地分辨出被双酶切的插入片段。转染A549细胞后均产生特异性的表达抑制效应，抑制率为50％～83．2％。结论采用非变性聚丙烯凝胶电泳成功筛选出TGF—β1为靶点的siRNA表达质粒，并可广泛应用于筛选siRNA质粒。

关键词：rnai 非变性聚丙烯凝胶电泳 

单位：第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军胸外科中心; 重庆400042