摘要：目的构建含胸苷激酶基因（TK自杀基因）的pGEX-4T-2-TK原核表达质粒,观察其在大肠杆菌中表达情况,为肿瘤基因治疗奠定基础。方法聚合酶链式反应（PCR）扩增TK基因片段,利用限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ将其连接至原核表达载体pGEX-4T-2内,再将连接产物转化入大肠杆菌,挑取单菌落,提取质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序。将转化正确的大肠杆菌培养过夜,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后观察蛋白表达情况。结果TK基因片段成功连接至载体pGEX-4T-2中,在大肠杆菌BL21中可得到稳定表达的目的蛋白。结论pGEX-4T-2-TK原核表达质粒构建成功,为后续肿瘤基因治疗研究奠定了基础。

关键词：自杀基因 质粒构建 聚合酶链式反应 

单位：四川省宜宾市第二人民医院肿瘤科 644000