摘要：目的 建立成年大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ细胞）分离、纯化、原代培养和鉴定的技术方法,并观察其体外生长特性及SP-A表达情况.方法 将0.08%胰蛋白酶消化液从气管注入肺组织,消化分离ATⅡ细胞.将大鼠IgG包被的培养皿免疫吸附纯化后,进行原代培养.用倒置相差显微镜观察细胞生长情况,透射电镜（TEM ）鉴定细胞,改良巴式染色法鉴定并计算细胞纯度,MTT法检测细胞增殖情况,Western blot检测细胞表达SP-A动态变化.结果 细胞产量约为2.2×107个/只大鼠.电镜下观察到ATⅡ细胞特征性结构--板层小体;纯度大于 90%.体外培养36～72 h时细胞生长良好,细胞质内有较多颗粒;96 h后细胞呈长索形,细胞内颗粒减少,并出现空泡.ATⅡ细胞表达SP-A在36 h左右达高峰,之后表达减弱.结论 利用0.08%胰蛋白酶消化分离和大鼠IgG免疫吸附纯化可获得满意的原代ATⅡ细胞.培养36～72 h时细胞增殖旺盛,生长良好,SP-A表达丰富,是进行体外实验的良好时期.

关键词：细胞培养 改良巴氏染色 板层小体 

单位：南京医科大学附属南京儿童医院急诊科 江苏210008 重庆医科大学附属儿童医院急诊科 400014