摘要：目的构建含大鼠血小板衍生生长因子C（PDGF—C）基因的pAD-EGFP—PDGF—C的重组腺病毒表达载体，体外转染骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）并观察目的基因蛋白及mRNA表达情况。方法通过逆转录聚合酶链式反应技术（RT—PCR）法从pIRES2-EGFP—PDGF-C真核表达载体中获得PDGF-C目的片段，经BP重组与LR重组插入到pAD／CMV／V5-DEST，构建pAD-PDGF-C-IRES2-EGFP腺病毒载体。酶切及DNA测序鉴定后转染HEK293A包装、纯化，测定病毒滴度后转染大鼠骨髓源性EPCs，应用Real—timeqPCR、蛋白免疫印迹法（Western blotting）等方法检测PDGF—C蛋白及mRNA的表达。结果核酸内切酶消化及PCR分析证实PDGF-C基因成功插入pAD／CMV／V5-DEST腺病毒载体，转染后荧光显微镜下观察可见绿色荧光蛋白表达，转染48h后实时定量酵素聚合反应技术（Real—time qPCR）测定EPCs中PDGF-C含量明显提高（P〈0．05），Wester blotting检测证实在46×10^3存在特异性条带。结论成功构建了大鼠PDGF—C基因的腺病毒表达载体pAD-EGFP—PDGF—C，体外转染大鼠骨髓源性EPCs能高效表达目的基因产物，为后续研究PDGF-C基因功能以及进-步开展基因治疗奠定了基础。

关键词：血小板衍生生长因子c pad cmv 内皮祖细胞 转染 

单位：重庆医科大学附属第二医院血管外科 400010