摘要:目的:建立检测人AnnexinⅡmRNA水平的SYBR Green实时荧光定量PCR方法,并用其测定人乳腺癌细胞MDA-MB-231和 MCF-7中AnnexinⅡmRNA水平。方法根据人AnnexinⅡ mRNA的保守序列设计特异性引物,提取人乳腺癌细胞总 RNA,并逆转录为cDNA,胶回收纯化PCR产物,并与pGM-T载体连接构建质粒标准品,进一步通过SYBR Green实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞中 Annexin ⅡmRNA水平。结果该方法标准曲线的r2为0.997,融解曲线分析显示单个峰,pGM-T AnnexinⅡ质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6.2%、7.8%(高拷贝)和9.1%、12.3%(低拷贝)。进一步研究表明人乳腺癌细胞 MDA-MB-231中 AnnexinⅡmRNA水平显著高于 MCF-7细胞(P<0.01)。结论建立的检测人 AnnexinⅡmRNA水平的 SYBR Green实时荧光定量PCR方法特异性、重复性好,可用于人乳腺癌细胞中 AnnexinⅡ mRNA的定量检测。
关键词:乳腺肿瘤 sybrgreen实时荧光定量pcr
单位:重庆市肿瘤研究所检验科 400032
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