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慢病毒载体介导CGRP基因体外转染及对MSC生物学特性的影响

陈攀科 石蓓 许官学 刘志江 龙仙萍 张巍 马帅 重庆医学 2015年第14期

摘要:目的探讨慢病毒载体介导降钙素基因相关肽(CGRP)基因体外转染间充质干细胞(MSC)及其对MSC生物学特性的影响。方法大鼠MSC进行分离、培养及鉴定。CGRP重组慢病毒转染MSC后,采用荧光显微镜和流式细胞技术测定其转染率。实时定量PCR、免疫荧光细胞化学及ELISA法检测MSC中CGRP的表达。慢病毒转染后通过MTT、β-半乳糖苷酶染色和诱导分化评价MSC的增殖、衰老及分化能力。结果慢病毒载体介导CGRP基因转染MSC后48h可稳定表达,MOI=30时,转染率达80%以上。与MSC组和空载病毒转染(MSC-EGFP组)比较,CGRP修饰的MSC(MSC-CGRP组)中CGRP的mRNA和蛋白表达水平增高(均P〈0.01)。MTT、β-半乳糖苷酶染色和诱导分化结果显示,病毒转染后对MSC增殖、衰老及向内皮分化基本没有影响。结论 MSC是一种理想的基因载体细胞,可作为CGRP基因转染的靶细胞用于基因治疗,为后续体内、体外实验奠定基础。

关键词:降钙素基因相关肽转染间充质干细胞生物学特性

单位:遵义医学院附属医院心血管内科 贵州遵义563000

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