摘要：目的利用慢病毒载体系统构建稳定表达HIF1α的A549细胞系。方法以NCBI人HIF1αa基因编码序列为模板，设计并合成引物，PCR法扩增HIF1α。酶切回收的HIF1α片段与制备的慢病毒载体HBLV—RFP—Puro重组反应。PCR和基因测序鉴定重组质粒。重组质粒和辅助质粒共转染293T细胞。包装好的病毒经过滤、浓缩后，利用稀释计数法测定病毒滴度。制备好的慢病毒感染A549细胞，采用药物筛选稳定转染细胞系。荧光显微镜及Westernblot检测观察转染及筛选效果。结果PCR扩增HIF1α片段经鉴定成功，重组质粒经PCR、基因测序鉴定构建成功。成功包装获得高滴度LV—HIF1α。LV-HIF1α感染A549细胞后经药物筛选，荧光显微镜下细胞带有红色荧光，Westernblot结果显示LV-HIF1α组HIF1α的表达水平明显高于对照组。结论慢病毒载体介导HIF1α稳定表达的A549细胞系构建成功。

关键词：慢病毒载体 稳定表达 a549 

单位：南昌大学第一附属医院心胸外科; 南昌330006; 南昌大学第一附属医院心血管内科; 南昌330006