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球等鞭金藻Δ5去饱和酶基因IgD5在拟南芥中的功能鉴定

刘江; 孙全喜; 李新征; 亓宝秀 作物学报 2013年第05期

摘要:从球等鞭金藻中克隆到一个△5去饱和酶基因,命名为IgD5。系统发育树分析表明,该基因编码产物与来源于巴夫藻Pavlovasalina的△5去饱和酶亲缘关系最近。此前通过酿酒酵母表达系统,证明IgD5对(06脂肪酸具有△5去饱和酶活性,但并未鉴定IgD5对ω3脂肪酸的催化活性。我们将IgD5转化能够内源合成二高-γ-亚麻酸(DGLA,20:3△^8,11,14)和二十碳四烯酸(ETA,20:4△^8,11,14,17)的已携带2个基因的拟南芥(简称TMA2),通过PCR及RT-PCR筛选阳性植株,提取转基因阳性植株叶片总脂肪酸,用气相色谱分析法检测到花生四烯酸(AA,20:4△^5,8,11,14)和二十碳五烯酸(EPA,20:5△^5,8,11,14,17),含量分别达7.44%和2.07%,转化效率分别为68%和60%,证明IgD5在转基因植物中具有△5去饱和酶的活性,对603/606脂肪酸没有明显偏好性,并且催化活性远高于其在酵母中的活性。在转IgD5的TMA2中除了AA和EPA,没有检测到其他新脂肪酸,表明IgD5底物专一性很强,是一个可用于植物转基因替代生产鱼油的良好基因。

关键词:球等鞭金藻花生四烯酸二十碳五烯酸拟南芥

单位:作物生物学国家重点实验室/山东农业大学生命科学学院; 山东泰安271018

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