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茶毛虫核型多角体病毒ph基因抗体的制备与利用

王礼中 肖强 张传溪 茶叶科学 2008年第04期

摘要:以茶毛虫核型多角体病毒(EupsNPV)的基因组DNA为模板,PCR扩增出全长为741bp的ph基因编码区片段。将Ep-ph编码区插入pET-28-a,构建了原核表达载体pET-28-a-Ep-ph,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行了高效的表达。以经表达纯化的目的融合蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔,制备了EupsNPV的肋抗体,测得的抗体效价为6.4×10^4。Western blotting检测表明制得的抗体对核型多角体病毒有良好的特异性。利用制备的抗体用间接ELISA方法对茶毛虫病毒样品进行了定量分析,得到线性回归方程为y=0.4152x-0.8299,相关系数r=0.9897(P〈0.01)。间接ELISA方法表明该抗体可以用于核型多角体病毒生物农药的定量检测,从而为核型多角体病毒的检测农药制剂提供了一种准确有效的方法。

关键词:茶毛虫核型多角体病毒多角体蛋白基因多克隆抗体间接elisa检测

单位:中国农业科学院茶叶研究所 浙江杭州310008 浙江大学应用昆虫研究所 浙江杭州310029

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