摘要：肉桂酸4-羟基化酶（Cinnamate 4-hydroxylase, C4H）是茶树苯丙烷代谢途径中的关键酶,能够影响木质素和类黄酮等次级代谢物的生物合成.本文采用5′-RACE技术,克隆了茶树肉桂酸4-羟基化酶基因（CsC4H）的全长序列,其中开放阅读框长1 518 bp,编码505个氨基酸,推测蛋白分子量为58.15 kD,理论等电点为9.29.利用基因组步移技术克隆得到该基因上游1 840 bp的启动子序列.该启动子区域除了分布有TAAT-box和CAAT-box等基本转录元件外,还存在多个诱导型和组织特异型的顺式作用元件.实时荧光定量PCR结果表明该基因在芽、叶、茎、根中都有表达.将该基因重组至表达载体pYES-DEST52上,并在酿酒酵母WAT11中进行真核表达.利用LC-MS方法检测酶反应产物,结果表明目的蛋白能够催化肉桂酸生成p-香豆酸.

关键词：茶树 启动子 表达分析 真核表达 

单位：安徽农业大学教育部茶叶生物化学与生物技术重点实验室 安徽合肥230036 安徽农业大学生命科学学院 安徽合肥230036