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茶树丙氨酸氨基转移酶基因的克隆与表达分析

白培贤; 王丽鸳; 韦康; 阮丽; 成浩; 张芬; 张成才 茶叶科学 2016年第04期

摘要:丙氨酸氨基转移酶(AlanineAminotransferase,AlaAT)是与碳氮代谢相关的一种重要酶类。采用反转录PCR的方法克隆了茶树CsAlaAT1的cDNA序列,该序列全长1747bp,包含一个完整的ORF(1626bp),编码541个氨基酸,推导的蛋白质分子量为59.4kD,理论等电点(pI)为5.82。同源比对结果表明,CsAlaAT1含有丙氨酸氨基转移酶亚家族保守的辅酶磷酸吡哆醛结合位点,其氨基酸序列与拟南芥AtAlaAT1蛋白的相似性为84%。二级结构预测显示该蛋白由α-螺旋(40.67%)、无规则卷曲(29.57%)、β-折叠(13.68%)和延伸链(16.08%)组成,定位于线粒体,不含信号肽与跨膜结构。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测发现CsAlaAT1在茶树各组织中均有表达,在根中的表达量最高;CsAlaAT1基因表达对氮素的响应研究表明,成熟叶中CsAlaAT1受氮素诱导上调表达,高浓度(1mmol·L-1NH4NO3)氮素的诱导效应比低浓度(0.1mmol·L-1NH4NO3)氮素诱导效应更强烈;在根中,处理24h后,高氮诱导CsAlaAT1上调表达,低氮诱导CsAlaAT1下调表达。

关键词:茶树丙氨酸氨基转移酶克隆表达氮素诱导

单位:中国农业科学院茶叶研究所/国家茶树改良中心/农业部茶树生物学与资源利用重点实验室; 浙江杭州310008; 中国农业科学院研究生院; 北京100081

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