摘要:目的 构建稳定表达乙型肝炎病毒x基因(HBVx)的正常人肝细胞株。方法用PCR法扩增含EcoRI和HindⅢ酶切位点的x基因序列,构建HBVx基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBVx,转化大肠杆菌DHSct,筛选阳性克隆并对其进行双酶切和测序鉴定;用脂质体转染法将HBVx基因导入Chang细胞系,G418筛选,RT-PCR和Westernblot鉴定。结果x基因亚克隆入pcDNA3.1(+),含有完整的x基因片段,转染后Chang细胞有HBVxmRNA表达,Chang/HBVx有HBVx蛋白的表达。结论构建了稳定表达HBVx基因的肝细胞株Chang/HBVx。
关键词:肝细胞 乙型肝炎病毒x基因 真核表达载体 转基因细胞模型
单位:赣南医学院第一附属医院 江西赣州341000 中山大学附属第一医院
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