摘要：目的构建稳定高表达CYP2E1基因的肝癌HepG2细胞系。方法通过NCBI查询CYP2E1的编码序列,设计并构建表达质粒p LV（Exp）-Puro-CMVm-CYP2E1,用载体对应的慢病毒包装质粒（p MDLg/pRRE、pRSVREV和p MD2.G）共同转染293T细胞。利用携带CYP2E1基因的慢病毒（Lenti-CYP2E1-e GFP-Puro）感染HepG2细胞系,采用嘌呤霉素抗性筛选方法构建高表达CYP2E1肝癌HepG2细胞系。增强绿色荧光蛋白检测转染情况,荧光定量PCR及Western blotting检测HepG2、空载及转染CYP2E1基因的HepG2细胞系中CYP2E1 mRNA和蛋白。结果 HepG2细胞系均成功转染CYP2E1基因。HepG2、空载及转染CYP2E1基因的HepG2细胞系中CYP2E1mRNA相对表达量分别为1.02±0.06、1.06±0.05、7.42±0.07,蛋白相对表达量分别为0.26±0.02、0.29±0.01、1.61±0.08,转染CYP2E1基因的HepG2细胞系与前两者比较,P均〈0.05。结论通过慢病毒转染成功构建了稳定高表达CYP2E1基因的肝癌HepG2细胞系。

关键词：cyp2e1基因 慢病毒载体 肝癌 hepg2细胞 

单位：川北医学院 四川南充637007 川北医学院附属医院