摘要：目的构建人乳腺癌MDA-MB-231细胞人类高迁移率族蛋白A2（HMGA2）稳定表达株。方法取对数生长期MDA-MB-231细胞,提取细胞总RNA,逆转录含HMGA2基因的c DNA;以c DNA为模板,根据其CDS序列设计含有EcoR1、Bam H1限制性内切酶位点的引物序列,采用PCR法扩增出带有双酶切位点的HMGA2目的基因;采用双酶切法将目的片段连接到慢病毒表达质粒p LVX-IRES-Puro中,获得重组的p LVX-HMGA2表达载体。p LVX-HMGA2表达载体、包装质粒共转染人肾上皮细胞系293T,提取携带HMGA2的重组慢病毒。采用菌液PCR、重组质粒双酶切、质粒PCR验证及测序比对鉴定获得的重组质粒。取适量对数生长期MDA-MB-231细胞,分为两组,观察组、对照组分别感染重组慢病毒Plv-HMGA2、空载慢病毒Plv-Vector,感染48 h加入1μg/m L嘌呤霉素筛选。分别采用实时荧光定量PCR法、Western blotting法检测细胞HMGA2 mRNA、蛋白。结果观察组、对照组细胞HMGA2 mRNA相对表达量分别为10 273.93±4 290.77和1.18±0.81,二者比较,P〈0.05。观察组、对照组细胞HMGA2蛋白相对表达量分别为1.570±0.080和0.110±0.002,二者比较,P〈0.05。结论成功构建MDA-MB-231细胞HMGA2稳定表达株。

关键词：高迁移率族蛋白a2 乳腺肿瘤 乳腺癌 

单位：天津医科大学; 天津300070