摘要：用经典的spizizen方法将穿梭质粒pLJ导入Bacillus subtilis168、Bacillus subtilisWB600、Baci／／ussubtihsW-B800中，均能达到70多个转化子／μgDNA的较高转化效率，但用此方法将该质粒导入由本实验室筛选并保存的野生型BacillussubtilisNx-2中，不能获得转化子。本研究对spizizen转化方法进行了改进。通过添加不同浓度的吐温-80，DMSO、丙酮、甲苯、乙醇等有机溶剂，均能获得转化子。同时，本研究对转化条件进行了优化，分别选取吐温-80、DMSO、甲苯等3种效果较好的添加剂设计正交实验。试验结果表明，在添加4％吐温-80、3％DMSO、1％甲苯的条件下得到了34个转化子／斗gDNA的较高转化效率。还研究了质粒与感受态共培养时间和感受态稀释倍数对转化的影响，当质粒与感受态共培养时间为3h，感受态稀释5倍时．转化效率较高。

关键词：枯草芽孢杆菌 spizizen转化 有机溶剂 

单位：南京工业大学生物与制药工程学院; 江苏南京210009