摘要：[目的]研究奶牛瘤胃内参与蛋白质降解过程中二肽基肽酶IV（dipeptidylpeptidaseSIV，DPP—IV）的序列特征和酶学性质。[方法]从奶牛瘤胃微生物Fosmid文库中挑选17664个克隆，利用dpp-IV简并引物筛选含dpp-Ⅳ的阳性克隆。提取阳性克隆的质粒，用限制性内切酶Hind Ⅲ进行酶切。PCR扩增含dpp-IV目的片段，并克隆测序。对阳性克隆的Fosmid末端进行测序。提取阳性克隆粗酶液，利用底物Gly-Pro-pNh检测肽酶活性。[结果]筛选后获得10个含有dpp-IV的阳性克隆（命名为DPI-DPI0）。Fosmid末端序列经BLASTX比对后发现78％的序列可以与数据库的已知序列相匹配，但相似度变化较大（44％-94％）。DPP—IV序列经BioEdit比对后，发现均含有N端保守区域（DWVYEEE）和C端催化区域（GWSYGG），经BLASTP比对发现阳性克隆的DPP—IV分别与Cyclobacteriummarin0／11（43％）、Capnocytophagasp．（63％）、Prevotellaruminicola23（66％）和Solitaleacanadensis（50％）的DPP—IV相似度高。酶活力检测发现DP7肽酶活力最高，为6．88u·mg-1。[结论]从瘤胃微生物Fosmid文库中获得了10个含有dpp-IV的阳性克隆，它们具有不同的dpp-IV序列特征和肽酶活性。

关键词：瘤胃微生物 fosmid文库 末端序列 酶活性 

单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室 100193 内蒙古民族大学动物科技学院 内蒙古通辽028000