摘要：【目的】克隆苹果中的两个ERF（ethylene responsive factor）转录因子，对其序列与表达进行分析；并进一步构建原核表达载体，在大肠杆菌中诱导融合蛋白表达，为解析两基因的抗病功能及作用机制奠定基础。【方法】首先，将抑制性消减杂交筛选到的EST序列进行BLAST比对，根据比对获得的MdAP2D4与MdAP2D19的cDNA序列设计引物进行克隆；然后，利用MEGA4．1软件将两个ERF蛋白与拟南芥的AP2家族蛋白进行聚类分析，对保守的hP2功能域的氨基酸序列进行分析；并进一步利用RT-PCR检测两基因对外源MeJA的响应；最后，将两个基因分别连接到原核表达载体PCEX-4T-1上，利用IPTG对转化的大肠杆菌BL21进行诱导。【结果】MdAP2D4与MdAP2D19两个基因均与拟南芥B3组ERF亲缘关系最近，在叶片中表达较高，都能被外源的MeJA诱导表达。SDS-PAGE检测结果表明，两个基因的融合蛋白均能够被IPTG诱导表达。【结论】MdAP2D4与MdAF2D19为B3组ERF转录因子，外源MeJh能够诱导其表达。

关键词：抑制性消减杂交 茉莉酸甲酯 乙烯反应因子 原核表达 抗病性 

单位：山东农业大学园艺科学与工程学院/作物生物学国家重点实验室 山东泰安271018 中国农业科学院果树研究所/农业部园艺作物种质资源利用重点实验室 辽宁兴城125100 辽宁省果树科学研究所 辽宁熊岳115009