摘要：【目的】筛选可靶向干扰牛的SREBP1基因的有效shRNA，构建相应腺病毒载体并包装重组腺病毒，为在细胞水平上研究SREBP1基因的功能和作用机制提供基础。【方法】以秦川牛SREBP1基因为研究对象，首先靶向其编码区（codingsequence，CDS）序列设计并合成6条干扰和1条阴性对照shRNA，并构建表达载体pENTR—u6-shRNA。然后与载体psiCHECK-II—SREBP1共转染293A细胞，筛选有效的pENTR—u6-shRNA。其次将筛选的pENTR-u6-shRNA和阴性对照pENTR-U6-NC分别与腺病毒骨架载体pAd／PL-DEST体外重组，得到腺病毒重组载体，并在293A细胞包装扩繁得到高滴度腺病毒，GFP标记法测定病毒滴度。最后将病毒侵染牛前体脂肪细胞，实时荧光定量法（qRT—PCR）检测干扰效率。【结果】筛选出靶向牛SREBP1基因干扰效率为87．4％的shRNA-1053。构建了pad～1053和阴性对照pAd—NC重组腺病毒载体并包装得到Ad-1053和Ad—Nc高滴度病毒，测定得到的病毒滴度分别为7×108。GFU．mL^-1和9×10^8GFU·mL^-1。Ad-1053和hd-NC分别侵染牛前体脂肪细胞，qRT—PCR检测结果显示Ad-1053可显著降低SREBP1基因的mRNA水平（干扰率〉85％），而Ad-NC对SREBP1基因表达无明显影响。【结论】成功筛选得到靶向干扰牛SREBP1基因的有效shRNA，并包装扩繁获得相应的高滴度重组病毒。

关键词：牛 srebp1 shrna 重组腺病毒 

单位：西北农林科技大学动物科技学院 陕西杨凌712100 国家肉牛改良中心 陕西杨凌712100