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水稻纹枯病菌6-磷酸葡萄糖胺合成酶基因的克隆、测序及表达分析

罗楚平 刘永锋 陈志谊 王晓宇 方先文 陈忠明 刘邮洲 聂亚锋 张荣胜 中国水稻科学 2012年第02期

摘要:为筛选新型水稻纹枯病菌GlmS活性抑制物质,采用3’RACE和5’RACE克隆了水稻纹枯病菌GImS的基因组DNA序列和完整的cDNA序列。GlmS基因组DNA序列全长2529bp,含有8个内含子;GImScDNA序列全长2094bp,推测编码一个含有697个氨基酸残基。分子量约为76.7kD的蛋白质。生物信息学分析表明水稻纹枯病菌GImS含有1个谷氨酰胺氨基转移酶结构域和2个葡萄糖异构酶结构域。采用大肠杆菌重组融合表达GImS,重组蛋白的分子量经过葡聚糖凝胶层析和SDS—PAGE电泳测得分别为306kD和77kD,表明GImS是由4个相同大小亚基组成的多聚酶复合体。重组蛋白的酶学性质研究表明其最适反应温度为37℃,最适pH为6.4,42℃下的半衰期为1h,在pH5.5~7.5时比较稳定。GImS催化反应能被己糖胺通路末端产物鸟苷氮乙酰葡萄糖胺反馈抑制。

关键词:水稻纹枯病菌活性物质克隆表达

单位:江苏省农业科学院植物保护研究所 江苏南京210014 江苏省农业科学院粮食作物研究所 江苏南京210014 南京农业大学植物保护学院 江苏南京210095

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