摘要:目的:利用磁珠作为载体,建立快速HIV-P24核酸适配体的SELEX筛选方法。方法:利用SELEX技术、磁珠分离及实时定量PCR技术,从随机寡核苷酸库中快速筛选出能与HIV-P24特异结合的寡核苷酸,利用凝胶阻滞实验鉴定所筛选到的HIV-P24核酸适配体复合物,通过连接Pmd18-Tvector,转化E.ColiDH5a感受态细胞得到了阳性克隆。结果:经过4轮筛选并运用凝胶阻滞实验验证了HIV-P24核酸适配体复合物条带明显被阻滞,利用交错PCR鉴定了所挑取的阳性克隆,也得到了测序序列。结论:利用SELEX技术、磁珠核酸分离技术和实时定量PCR技术成功筛选到了2条能与HIV-P24特异性结合的核酸适配体,这几种方法相结合操作简单、能有效提高筛选效率,并且便于机械化操作,为今后的适配体筛选打下良好基础。
关键词:磁珠 selex技术 实时定量pcr 核酸适配体
单位:兰州理工大学生命科学与工程学院; 甘肃省医学科学研究院医学分子生物学研究中心; 兰州大学生命科学学院; 西北师范大学生命科学与工程学院
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