摘要：目的在大肠杆菌中高效融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6和CFP-10,获得纯化的重组ESAT6-CFP10(rCFP10-ESAT6)融合蛋白抗原.方法通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction ,PCR)扩增CFP10-ESAT6融合基因;以质粒pET-28a为表达载体,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3);以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,通过SDS-PAGE电泳和蛋白免疫印迹法 (Western blotting) 鉴定rCFP10-ESAT6在大肠杆菌中的表达,确定rCFP10-ESAT6蛋白抗原在大肠杆菌中的表达形式;采用Chelating Sepharose Fast Flow蛋白纯化试剂纯化重组蛋白.Western blotting及酶联免疫吸附试验(ELISA)分析重组蛋白的免疫原性.结果重组质粒pET28a-CFP10-ESAT6中目的基因测序结果与报道序列相同;在大肠杆菌中以可溶性形式表达;分子量约28kDa,表达量约占菌体总蛋白的46%,纯化后的rCFP10-ESAT6样品经SDS-PAGE和激光密度扫描分析表明其纯度为90%左右,每100 ml培养菌可获得16 mg左右的重组蛋白;Western印迹结果证实重组蛋白与His·tag单克隆抗体及确诊的肺结核病患者血清发生特异免疫反应.ELISA结果分析表明,该重组抗原能区分肺结核患者血清及正常人血清.结论成功地表达和纯化了结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白,该重组蛋白具有特异的免疫原性.

关键词：结核分枝杆菌 大肠杆菌 免疫学 基因表达 

单位：中国人民解放军第309医院; 北京; 100091