摘要：目的构建Mtb ESAT6-RpfE（早期分泌抗原靶6-复活促进因子E）的原核表达载体,表达和纯化融合蛋白,并对其免疫原性进行研究。方法分别以Mtb H37Rv及临床株的基因组为模板,PCR扩增esat6、rpfE基因,依次插入pET30a质粒并在大肠埃希菌BL21中表达纯化ESAT6-RpfE蛋白。采用完全随机的方法将C57BL/6小鼠分组,每组6只,共进行了两次实验,第一次实验分为ESAT6、RpfE、ESAT6-RpfE、PBS、BCG五组,佐剂为二甲基三十六烷基胺（dimethyl-dioctyldecyl ammonium bromide,DDA）;第二次实验有ESAT6-RpfE、PBS、BCG三组,佐剂为DPG[DDA＋poly（I：C）＋明胶]。分别于0、3、6周皮下免疫C57BL/6小鼠。末次免疫8周后,用特异性抗原ESAT6及RpfE刺激,检测其分泌IFN-γ的水平;ELISA检测血清特异性抗体IgG2b、IgG1。结果PCR扩增的esat6、rpfE基因序列与GenBank报道一致;融合蛋白主要以包涵体形式表达;亚单位疫苗免疫动物能够分泌RpfE特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[（427.13±100.46）]显著高于PBS组（26.13±22.34;q=7.924,P〈0.001）;分泌ESAT6刺激特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[（506.50±140.40）]明显高于PBS组（19.25±14.75;q=11.36,P〈0.001）和BCG组（125.5±46.41;q=8.882,P〈0.001）。ESAT6-RpfE免疫组能诱导产生特异性抗体。结论成功构建并表达ESAT6-RpfE融合蛋白。此融合蛋白可在C57BL/6小鼠中诱导抗原特异性的免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究。

关键词：疫苗 亚单位 重组融合蛋白质类 细菌蛋白质类 细胞因子类 

单位：兰州大学结核病研究中心暨病原生物学研究所 730000 美国霍普金斯大学布隆博格公共卫生学院分子微生物学与免疫学系