摘要：目的利用浓度梯度倍增的氯法齐明（clofazimine，Cfz）体外诱导获得结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）耐药株，并进行耐药机制的初步研究。方法选取Mtb标准株H37Rv，从亚最低抑菌浓度（sub-minimal inhibitory concentration，sub-MIC）[1／8MIC（按照Cfz的MIC值为0．12μg／ml配置）、1／4MIC、1／2MIC…]开始，在Cfz浓度倍增的7Hll固体培养基上进行传代培养，逐步诱导菌株对Cfz的耐药性，并通过药物敏感性试验和全基因组测序来进行验证；同时利用Alamarblue微板分析法（microplate Alamar blue assay，MABA）测定诱导耐药菌株对10种抗结核药物（INH、RFP、EMB、Mfx、Lzd、Cs、Cm、TMC207、TBI-166、Cfz）的MIC情况。结果Mtb标准株经诱导后对Cfz的MIC值是诱导前的32-64倍（诱导前Cfz的MIC值是0．12ttg／m1）。对10种抗结核药物敏感性试验显示，Cfz诱导耐药菌株对TMC207（Bendaquiline）及TBI-166产生交叉耐药。耐药株在7H9液体培养基中进行无药连续培养10代后，测定其MIC值无明显变化，MIC数值都稳定在32MIC64MIC之间，对此诱导耐药株进行全基因组测序共检测到195个单核苷酸多态性（single nueleotide polymorphisma，SNP）突变和19个插入缺失（InDel）突变。结论从亚MIC药物浓度开始，逐渐递增的长期药物刺激能够诱导结核分枝杆菌对氯法齐明的获得性耐药，获得的耐药株耐药性稳定。

关键词：结核分枝杆菌 氯法齐明 抗药性 细菌 体外研究 

单位：首都医科大学附属北京胸科医院耐药结核病研究北京市重点实验室北京市结核病胸部肿瘤研究所药物研究室 101149