摘要：目的通过构建花生四烯酸12-脂氧合酶（ALOX-12）基因（ALOX-12基因）启动子区域rs3840880位点不同基因型的双荧光素酶表达质粒，分析此单核苷酸多态性（singlenucleotide polymorphisms，SNP）对ALOX-12基因启动子活性的影响及其对基因表达的影响，阐明功能性SNP调控结核病易感的分子机制。方法从全血样本中提取人全基因组，PCR扩增ALOX-12基因启动子区域包含rs3840880位点在内的约1700bp的基因片段，构建pGL3-Basic-rs3840880G质粒，对此质粒进行定点突变得到pGL3-Basim-rs3840880D放散型（DEL）质粒，分别转染人宫颈癌细胞株Hela细胞后使用双荧光报告酶检测系统（dual luciferase assay system）检测相对荧光值。结果成功构建了ALOX-12基因启动子区rs3840880位点等位基因G的表达质粒pGL3-basim-G，采用定点突变技术成功将pGL3-basic-G质粒改造为pGL3-Basic-DEL质粒，测序验证后，两质粒其他序列完全相同。分别将此两个质粒转染Hela细胞并检测相对荧光比值[荧光值（F）／荧光（R）]后，发现pGL3-Basic质粒F／R=0．129，等位基因G的F／R=0．194，低于等位基因DEL质粒的F／R（0．274），采用单因素方差分析，二者之间的差异有统计学意义（F=25．09，P=0．001）。结论不同等位基因构建的质粒转染细胞后，荧光报告基因的表达差异具有统计学意义，故ALOX-12基因启动子区域的功能性SNPs确实能够影响启动子的活性，从而调控结核病的易感性。

关键词：多态性 单核苷酸 荧光光度测定法 结核病 基因表达调控 

单位：深圳市第三人民医院肺病医学中心广东省新发传染病诊治重点实验室; 518112