摘要：目的：了解问号钩端螺旋体（简称钩体）fliR基因的致病性。方法：分别从问号钩体黄疸出血群56601株DNA和pET42a质粒中扩增fliR基因和kana基因。构建fliR基因自杀质粒，并设计和合成特异性siRNA。采用分别基于自杀质粒的基因敲除、基于siRNA的基因沉默技术构建问号钩体fliR基因突变株，并用PCR、测序、半定量RT-PCR进行鉴定。采用小鼠单核-巨噬细胞J774A．1黏附试验和流式细胞术，检测敲除fliR基因的问号钩体突变株56601^fliR-Kana、siRNA阻断fliR基因的问号钩体突变株56601^siRNA-R2株黏附细胞，及诱导细胞坏死或凋亡能力的变化。结果：所克隆的fliR基因与GenBank中相应基因的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99．9％和100％，所克隆的kana基因核苷酸序列与pET42a图谱完全相同。56601^fliR-Kana可在含氨苄青霉素和卡那霉素的EMJH培养基中生长，PCR和测序结果证实56601^fliR-Kana株fliR基因中插入了kana基因。56601“睢‰“株fliR基因mRNA水平明显下降（P〈0．01），56601”RNA。砣株fliR基因mRNA水平也低于野生株（P〈0．05）。56601^fliR-Kana和56601^siRNA-R2黏附J774A．1细胞的能力基本消失，诱导J774A．1细胞坏死或凋亡的能力也明显减弱（P〈0．01）。结论：fliR基因是问号钩体毒力相关基因，其功能与问号钧体黏附细胞、诱导细胞凋亡或坏死密切相关。

关键词：钩端螺旋体 基因表达 细胞凋亡 flir基因 黏附 

单位：绍兴文理学院医学院 浙江绍兴312000 浙江省疾病预防控制中心 浙江杭州310051 浙江医学高等专科学校 浙江杭州310053 浙江大学医学院病原生物学系 浙江杭州310058