摘要：目的：建立稳定表达人CD14分子的Hela-CD14细胞系,为研究CD14分子及CD14相关性疾病提供研究材料。方法：以人CD14mRNA为模板,通过RT-PCR法扩增CD14基因,T-A克隆后测序核实CD14基因序列。通过EcoRⅠ/XbaⅠ双酶切和体外连接法将人CD14基因连接到真核表达载体pcDNA 3.1（＋）中,通过转化、克隆得到阳性重组质粒pcDNA 3.1（＋）/CD14。将pcDNA 3.1（＋）/CD14转染人宫颈癌Hela细胞,经G418筛选、定量PCR（qPCR）和免疫荧光检测CD14基因和蛋白的表达,筛选出稳定表达人CD14阳性的Hela-CD14细胞系。结果：测序显示,扩增到的人CD14基因序列正确,双酶切质粒结果表明,CD14基因成功克隆到pcDNA 3.1（＋）载体中;免疫荧光结果显示,人CD14主要以膜蛋白形式在Hela细胞上成功表达。结论：本研究建立了稳定的以膜蛋白形式表达人CD14抗原的细胞系Hela-CD14。

关键词：抗原 转染 重组 遗传 质粒 

单位：浙江大学附属儿童医院血液肿瘤科; 浙江杭州310003