摘要：目的：构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体（scFv）库，筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2（HER2）特异性scFv，为HER2和CXC趋化因子受体4（CXCR4）双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列。方法：取已确诊的乳腺癌患者癌旁淋巴组织，提取总RNA；构建可变区基因的T载体库，将重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因与pCANTAB连接肽连接，获得pCANTAB-scFv，电转化感受态大肠杆菌TG1；以M13K07辅助噬菌体进行感染，获噬菌体抗体库；利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测筛选后获得的噬菌体抗体活性，以免疫组织化学法检测抗体亲和力，并通过测序进一步鉴定。结果：成功构建大容量pCANTAB-scFv抗体库，获得的scFv长度为750bp，VH和VL长度分别为375和330kb；电转化大肠杆菌TG1后酶切验证插入片段大小正确，得到库容为2．48×10^8的大容量抗体库；通过噬菌体展示和淘洗筛选，富集针对乳腺癌细胞株SKBR-3表面抗原的抗体库；所得抗体对HER2有高度的亲和力和特异性，对乳腺癌组织HER2抗原也具有较高的亲和力；测序结果与人IgG抗体进行对比，所获得的scFv具有高度的人源性。结论：主要构建了大容量人源性抗乳腺癌细胞的噬菌体scFv库，并筛选获得可特异性识别人乳腺癌HER2的高亲和力scFv，为制备以HER2为靶点的抗肿瘤HER2和CXCR4双靶向融合蛋白提供了载体。

关键词：dna 基因文库 抗体 学 受体 

单位：蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心; 安徽蚌埠233000; 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室; 安徽蚌埠233000; 河南大学淮河医院检验科; 河南开封475000