摘要：目的利用Dox-on可调控哺乳动物表达系统将AT2R基因引入体外培养的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）,并经2次抗生素的筛选建立起了受四环素类似物Doxycycline（Dox）紧密调控、表达AT2R基因的双重稳定VSMC细胞系,在此基础上对骨桥蛋白（osteopontin,OPN）的mRNA表达受AngⅡ及其受体拮抗剂的影响进行研究。了解其在再狭窄防治中的意义。方法本研究通过常规分子生物学方法,建立Dox可调控表达AT2R基因的双重稳定大鼠VSMC细胞系。将该VSMC细胞系随机分为未转染对照组、转染组及AngⅡ、Dox、CV-11974、PD123319分别或同时干预组共8组。应用免疫印迹方法、RT-PCR技术,观察该VSMC细胞系中AT2R受调控表达情况,以及血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）及其1型、2型其受体拮抗剂干预上述细胞后OPN的mRNA表达情况变化。结果Dox-on可调控哺乳动物表达系统可成功介导AT2R基因在原代培养大鼠主动脉VSMC的表达,该表达受到Dox给予/去除的紧密调控;Dox干预可在48h内迅速诱导该VSMC细胞系表达AT2R,AT2R表达在Dox干预后72h进一步增强,差异有统计学意义（P〈0.01）。AT2R基因的可调控表达抑制由于AngⅡ干预VSMC后引起的OPN表达的增强（P〈0.01）。这一作用被AT1R拮抗剂CV-11974进一步增强（P〈0.01）;而被加入AT2R拮抗剂干预而取消;同时给予AT1R拮抗剂和AT2R拮抗剂时OPN的表达与基础状态时的情况一致。结论AngⅡ干预增强OPN的表达,该作用是通过AT1R介导的;经Dox诱导表达AT2R基因可以明显抑制这一生物学作用,说明在这一生物学效应上,AT2R具有与AT1R相拮抗的生物学功能。AT2R基因经诱导后可以通过调节OPN表达,进而可能对VSMC迁移、增殖和细胞外基质形成进行有效调控。

关键词：血管紧张素受体 血管平滑肌 四环素 基因 骨桥蛋白 

单位：第三军医大学西南医院心内科; 重庆介入心脏病学研究所; 重庆400038; 第三军医大学西南医院胸心外科; 重庆400038