摘要:目的构建大容量天然人源核糖体展示单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,为抗体研究提供方便有效的技术平台。方法收集健康献血志愿者的白细胞悬液,离心分离单个核细胞,抽提其总RNA,逆转录成cDNA、PCR及重叠延伸PCR法构建scFv文库,并通过第2次重叠延伸PCR在scFv DNA序列5′端添加T7启动子、茎环结构、核糖体结合位点,其3′端添加6×His标签、间隔序列(基因Ⅲ)、茎环结构等改造成核糖体展示天然人源scFv文库。结果成功构建了可用于筛选抗体的核糖体展示文库容量达10^13以上。结论成功构建了大容量天然人源核糖体展示scFv文库,为筛选到高亲和力和特异性抗体提供了技术平台。
关键词:核糖体展示 文库
单位:第三军医大学西南医院病理科 重庆400038
注:因版权方要求,不能公开全文,如需全文,请咨询杂志社