摘要：半胱氨酸蛋白酶是植食性昆虫体不可或缺的重要水解蛋白酶之一。本文从小贯小绿叶蝉的转录组数据库中获得半胱氨酸蛋白酶基因Eocyp的基因片段的转录本序列,利用RACE技术得到其c DNA全长序列,利用生物信息学技术对Eocyp所编码的理论氨基酸序列进行分析,使用q RT-PCR技术检测Eocyp在小贯小绿叶蝉不同发育阶段,雌、雄成虫不同部位以及不同温度和光周期下的表达量。结果表明,小贯小绿叶蝉Eocyp的全长c DNA序列包含一个1 656 bp的开放阅读框,编码551个氨基酸,并具有由24个氨基酸残基组成的信号肽。推测其相对分子量为62.09 k D,预测其分子式为C（2782）H（4163）N（737）O（835）S（25）;理论等电点为6.02,不稳定系数为36.10。Eocyp具有半胱氨酸蛋白酶基因的典型特征,即催化三联体Cys^357-His^499-Asn^519,同时具有ERFNIN,GNFD和GCDGG簇等保守结构域。Eocyp编码氨基酸序列与茶翅蝽CYP基因编码序列相似度最高。表达特征分析结果表明,Eocyp在小贯小绿叶蝉的各个生长时期均有表达,在5龄若虫时期达到最高;Eocyp在小贯小绿叶蝉雌、雄成虫的腹部均有较高的表达量;然而,Eocyp的表达量对于高、低温和不同光周期均无响应。这些结果为进一步研究Eocyp功能提供了理论依据。

关键词：小贯小绿叶蝉 半胱氨酸蛋白酶 克隆 表达 

单位：西北农林科技大学; 陕西杨凌712100; 中国农业科学院茶叶研究所; 浙江杭州310008; 农业部茶树生物学与资源利用重点实验室; 浙江杭州310008