摘要：目的 构建针对CD19的融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3,并观察其靶向性。方法 采用基因克隆技术,构建基因重组质粒p AZY-anti-CD19(Fab)-CH3,测序鉴定后,转化至大肠杆菌16C9,表达产物经Protein G亲和层析柱纯化后,采用SDS-PAGE电泳Western blotting法鉴定纯化蛋白,用高效液相分子排阻色谱法(HPLC-SEC)检测纯化后蛋白中二聚体的比例。采用流式细胞术检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3、anti-CD19(Fab)与CD19+的B系淋巴瘤Raji细胞的结合力,采用竞争免疫荧光结合实验检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3、anti-CD19(Fab)作用下亲代鼠源性抗体HIT19a和Raji细胞的结合力。结果 SDS-PAGE电泳和Western blotting法均观察到相对分子质量约65 k Da的蛋白条带,与融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3的分子量相符。纯化后蛋白中二聚体比例约为89%。与anti-CD19(Fab)相比,相同浓度的融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3与Raji细胞的结合能力较高。融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3作用下HIT19a-FITC与Raji细胞的结合荧光强度低于等浓度的anti-CD19(Fab)作用下HIT19a-FITC与Raji细胞的结合荧光强度。结论 成功构建并表达融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3。与单体antiCD19(Fab)相比,融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3与CD19+的B淋巴瘤细胞Raji的靶向性较好。

关键词：b淋巴细胞瘤 

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