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日本血吸虫新基因SjPP的筛选、克隆及对小鼠的免疫效果

姚利晓; 林矫矫; 傅志强; 朱传刚; 李浩; 陆珂; 刘金明; 石耀军; 沈阳; 蔡幼民 中国农业科学 2006年第08期

摘要:【目的】筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。【方法】利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5’RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研究在小鼠中的免疫保护效果。【结果】(1)获得4个日本血吸虫新的EST序列,即埘,p1(GenBank登录号BE974942)、mfs-3(GenBank登录号BE974944)、mfs-4(GenBank登录号BE974945)和mfs-5(GenBank登录号BE974946)。(2)mfs-5进行全长序列克隆,获得的日本血吸虫新基因驴(GenBank登录号AY902477)长1311bp,编码302个氨基酸,理论分子量为34.7kD,等电点为5.51;其氨基酸序列具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶(serine/threonine specific protein phosphatase,简称PP)的保守序列LRGNHE,并且含有该酶特异性抑制剂冈田酸的作用位点SAPNYC,与人的PP6、鼠PP6、果蝇PPV等蛋白的氨基酸序列具有高度同源性,分别达72%、70%和70%。(3)成功构建核酸疫苗pCMV—Script/船免疫BALB/c小鼠诱导产生肝组织减卵率为23.91%,粪便减卵率为31.91%。【结论】(1)获得日本血吸虫新的抗原基因卿(2)含聊基因的核酸疫苗在小鼠中诱导了部分免疫保护效果。

关键词:日本血吸虫东方田鼠核酸疫苗免疫保护

单位:中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心; 上海200232

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