摘要：从小麦胚乳中克隆了14-3-3基因，并将其分别插入pET29c和pET41c质粒，用热激法转化大肠杆菌BL21-CodonPlus （DE3）-RP，得到高效表达的蛋白，但融合蛋白主要以包涵体的形式存在。可溶性的融合蛋白可直接通过S-蛋白琼脂糖树脂纯化。包涵体经8 mol L-1尿素溶解变性，稀释复性后，结合到S-蛋白琼脂糖树脂上，也得到纯化的融合蛋白。复性后的融合蛋白对蔗糖合成酶活性表现抑制作用，说明包涵体14-3-3融合蛋白恢复活性。将结合14-3-3融合蛋白的S-蛋白琼脂糖树脂作为诱饵与小麦胚乳淀粉体提取液进行亲和杂交，与14-3-3蛋白特异互作的淀粉合成酶结合到S-蛋白琼脂糖树脂上，Western 检测结果表明, 淀粉体淀粉合酶I（SSI）、淀粉合酶II（SSII）、淀粉分支酶IIa（SBEIIa）、淀粉分支酶IIb（SBEIIb）和ADP焦磷酸化酶大亚基（SH2）与14-3-3蛋白存在互作，而淀粉分支酶I（SBEI）、淀粉磷酸化酶（SP）、D-酶（DE）和ADP焦磷酸化酶小亚基（BT2）不能与14-3-3蛋白结合，说明小麦胚乳14-3-3蛋白对淀粉体淀粉合成具有一定的调控作用。

关键词：表达 淀粉合成酶 蛋白互作 

单位：山东省农业科学院作物研究所; 山东济南250100; University; of; Guelph; Guelph; N1G2W1; Canada