摘要：目的建立小鼠骨髓来源调节性树突状细胞（DCreg）体外诱导培养和扩增的方法,并进行生物学及功能鉴定。方法取小鼠骨髓单个核细胞（BM-MNCs）,用重组小鼠白细胞介素4（rm IL-4）及重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子（rm GM-CSF）诱导分化,第6天细胞中含大量DCreg;取部分细胞加脂多糖（LPS）,继续培养2 d（第8天）分化为成熟DC（m DC）。观察培养过程中细胞形态变化,流式细胞术检测DCreg特异性表面分子CD11b和共刺激分子CD40、CD86。取小鼠脾脏分离的CD8＋T细胞,随机分为3组;A、B组将细胞分别与DCreg、m DC以5∶1、10∶1、20∶1混合培养4 d,C组细胞不处理。采用CFSE标记法检测CD8＋T细胞增殖情况,Real-time PCR检测CD8＋T细胞免疫功能分子穿孔素（Prf1）和颗粒酶B（Gzm B）mRNA。结果新分离的BM-MNCs呈圆形,体积较小;诱导第6天细胞集落数量增多,体积增大,细胞表面突起增多,CD11b阳性细胞比例达96.1%±2.7%。与m DC相比,DCreg中CD40、CD86表达阳性率降低（P均〈0.05）。与B组比较,A组细胞增殖率降低（P均〈0.05）;与B、C组比较,A组Prf1、Gzm B mRNA表达量降低（P均〈0.05）,与C组比较,B组Gzm B mRNA表达量升高（P均〈0.05）。结论 rm GM-CSF联合rm IL-4可成功诱导小鼠BM-MNCs向DCreg分化,且纯度高,并具有免疫抑制功能。

关键词：调节性树突状细胞 器官移植 免疫耐受 细胞培养 穿孔素 

单位：天津医科大学基础医学院 天津300070