摘要：目的构建针对高迁移率族蛋白B1（HMGBl）基因的特异性RNA干扰载体，建立稳定转染该干扰载体的人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）。方法根据HMGBl基因的编码序列及短发夹RNA（shRNA）设计原则，设计并合成针对HMGB1基因的特异性shRNA，将其定向克隆到pRNA—u6．1／Neo载体中，同时设立阴性对照，重组载体经脂质体转染HUVEC；转染细胞经类氨基糖抗生素样物质G418筛选，采用实时荧光逆转录-聚合酶链反应检测HMGB1mRNA表达，蛋白质免疫印迹法检测HMGB1蛋白表达。结果酶切鉴定和测序证实，重组质粒shRNA序列与设计的片段完全一致。HMGB1基因特异性RNA干扰载体能够显著抑制HMGBl在HUVEC细胞中的表达（mRNA：0．4635±0．0342比1．0340±0．0352，蛋白：0．4510±0．0200比1．0210±0．0110，均P〈0．05）。结论成功构建了靶向HMGB1基因的shRNA真核表达载体pRNA—HMGB1，并获得了稳定表达靶向HMGB1基因的shRNA的HUVEC细胞株，为进一步研究HMGB1在HUVEC细胞株中的生物学功能和作用机制奠定了基础。

关键词：高迁移率族蛋白b1 人脐静脉内皮细胞 转染 脓毒症 短发夹rna 

单位：中国医科大学附属第一医院重症医学科 辽宁沈阳110001