摘要：目的建立HBV基本核心启动子（BCP）区变异的快速检测方法。方法采用焦磷酸测序（pyrose-quencing）技术，设计一对引物，其中一条经生物素标记，PCR扩增产物含HBVBCPA1762T／G1764A双突变的区域，借用生物素包被葡聚珠纯化单链PCR产物，设计一条测序引物，运用焦磷酸测序技术对A1762T／G1764A两个变异点进行变异分析。通过对已知变异类型的HBV分离株进行测定分析，评价所建立方法的检测敏感性和特异性。结果PCR扩增后，可在2h内得到A1762T／G1764A两个变异点的突变情况。所建立方法的检测灵敏度达到HBV．DNA血清中的含量为10^3copies／ml；在所分析的HBVBCP区均可检测出变异株、非变异株及混合株，且所检测的结果与直接测序方法结果符合率为95％。结论Pyrosequencing技术用于检测病毒基因突变有高通量、自动化程度高和结果准确等特点，适用于对HBVBCP区突变进行快速高通量检测。

关键词：焦磷酸测序 肝炎病毒 乙型 基本核心启动子 变异 

单位：东南大学医学院附属南京市第二医院; 江苏南京210003