摘要：目的探讨构建表达小鼠角质细胞生长因子（KGF）基因重组腺病毒载体的方法。方法提取小鼠肺组织RNA，经逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）获得cDNA后，PCR扩增目的基因片段。将获得的KGF基因插入载体质粒pShuttle—CMV，构建穿梭质粒pShuttle—CMV—KGF（pKGF）。线性化pKGF后，转化人含AdEasy-1病毒骨架的BJ5183细菌中。筛选正确的同源重组质粒pAdEasy-1-pShuttle—CMV—KGF（pAd—KGF），转染HEK293细胞，产生病毒颗粒AdEasy-1-pShuttle—CMV—KGF（Ad—KGF）。进一步大量扩增病毒，氯化铯梯度离心纯化，测定病毒滴度。制备病毒Ad—GFP为对照，显微镜下观察转染率。结果①经限制性内切酶酶切和基因测序鉴定，证实pKGF构建成功；②限制性内切酶酶切确定穿梭质粒重组于病毒骨架；显微镜下观察HEK293细胞形态，证实病毒包装复制成功；⑧病毒滴度3．0×10^10pfu／ml，达到进一步体内、外实验要求。结论成功构建了重组腺病毒Ad—KGF，为了解KGF在肺部疾病中的作用以及进一步的基因治疗肺纤维化方法奠定了基础。

关键词：角质细胞生长因子 腺病毒 小鼠 肺 

单位：解放军总医院急诊科; 北京100853; 天津市天和医院; 300050; 浙江大学免疫系; 杭州200433