摘要：目的采用小片段RNA干扰（smallinterferenceRNA，siRNA）技术，通过构建系列小鼠4-1BB（m4—1BB）基因的特异性siRNA表达载体，体外观察对m4—1BB基因的瞬时沉默作用，筛选具有最佳干扰效果的siRNA表达载体。方法设计并合成4条针对小鼠4-IBB全长特异性的siRNA寡核苷酸序列，插入真核表达载体（pENTR^TM／U6），构建m4—1BB序列特异性siRNA表达载体，根据靶位点分别命名为p336、394、498及763siRNA，无关干扰质粒为pLacZsiRNA；通过体外m4—1BB真核表达质粒p4—1BB分别与各siRNA表达载体同时转染COS-细胞，48h后通过RTPCR和FACS（fluorescence-activatedcellsorter，荧光活化细胞分选仪）观测COS-7细胞4-1BBmRNA及蛋白表达水平。结果经测序分析，各m4—1BBsiRNA表达载体构建成功；其中p498siRNA与p4-1BB双质粒转染COS-7细胞，48h后可观察到细胞表面4—1BB分子明显下调，其胞内mRNA水平也显著降低，与无关干扰组比较，差异有统计学意义（P〈0.05）。其余siRNA载体，几乎无干扰效应，与无关干扰组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论我们所构建的p498siRNA真核表达载体，能明显干扰m4-1BB蛋白的瞬时表达，可望用于m4—1BBLentivirus干扰表达系统的构建，进一步在小鼠原代T淋巴细胞内实现高效4-1BB表达沉默，以深入研究4-1BB对T淋巴细胞的生物学影响。

关键词：rna干扰 

单位：第三军医大学全军免疫学研究所; 重庆400038