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中国马铃薯疮痂病菌快速PCR检测技术

郭凤柳 张海颖 于秀梅 赵伟全 刘大群 中国农业科学 2013年第23期

摘要:【目的】马铃薯疮痂病菌具有明显的组成多样性,通过筛选不同疮痂病菌的通用探针引物,建立针对该类病原菌的定性检测方法。【方法】以目前中国存在的不同致病种的代表菌株CPS-1(Streptomyces scabies)、CPS-2(S.galilaeus)、CPS-3(量acidiscabies)、CPS-4(S.turgidiscabies)为材料,根据NCBIGenBank中已登记的疮痂病菌特有毒素合成基因簇中的基因txtA、txtB、txtC(P450)、txtD(BOS)等序列设计5I物,对不同菌株的基因组扩增,选择特异性和稳定性较高的引物作为探针引物,经温度梯度筛选优化反应体系后建立成熟的检测技术。【结果】获得的通用检测5I物B1/B2对所有致病菌株均表现较好的特异性,可稳定扩出目的条带,而非致病菌株均无条带。利用孢子稀释法验证建立的检测方法对菌株DNA的灵敏度为20pg·μL^-1,对孢子的检测阈值约为4.0CFU/山。对测试样品基因组扩增结果表明,疮痂病原链霉菌、病薯样品组织、病田土样均检测到目的条带,而非疮痂病原链霉菌、健康薯块组织、非病田土样和其它菌株均未扩出目的条带,说明该方法的特异性较好。【结论】建立了马铃薯疮痂病菌的定性检测方法,可实现对菌株、病组织和土壤样品的快速检测。

关键词:马铃薯疮痂病菌pcr检测特异性引物

单位:河北农业大学植物保护学院/河北省农作物病虫害生物防治工程技术研究中心 河北保定071001

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