为建立一种基于侧流层析的重组酶聚合酶扩增技术(RPA-LF)的快速检测产单核细胞李氏杆菌的方法,以该菌溶血素基因hly为靶序列设计用于RPA试验的引物及探针。利用筛选到的引物和探针对RPA反应进行优化,结果表明RPA反应可在25~45℃较大温度范围内进行,10~25 min即可完成,其扩增产物在试纸条上仅需5 min即可获得检测结果。因此,在最佳反应温度(37℃)...
旨在建立一种检测黏液中猪流行性腹泻病毒(PEDV)特异性SIgA的ELISA方法,从而评价PEDV黏膜免疫水平。首先将PEDV的S1D基因(534~789 aa)克隆至质粒载体pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,其表达产物以包涵体形式存在。Western-blot验证蛋白大小为32 ku,且具有抗原活性。再以8 mol/L尿素变性蛋白,经纯化、梯度复性后作为包被抗原蛋...
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是牛的主要病原之一,对全球养牛业造成了巨大的经济损失。本文根据GenBank中BVDV基因组中5′-UTR序列合成引物,建立了同时检测BVDV两个基因型的RT-PCR方法。结果显示,所建方法具有较强特异性和敏感性,可扩增出长约300 bp的特异性片段,最低检测限量为6.8×10~3copies/μL。用该方法对30份临床样品进行病原检测,结果显示,BVDV...
本研究通过利用FK81细胞按常规方法对猫细小病毒进行分离鉴定。选取其中效价最高的分离株以不同剂量经口腔和鼻腔感染猫,通过测定LD50,观察临床症状、白细胞含量变化、组织病理变化等指标,构建动物发病模型。从86份疑似猫瘟粪便样品中成功分离到6株猫细小病毒,其中GX01株TCID50及血凝价均高于其他5株;不同剂量GX01感染猫后均表现出高热、腹泻、...
本研究旨在鉴定猪红细胞类补体受体Ⅰ型(complement receptor 1-like,CR1-like)的膜结合蛋白,以期为探讨CR1-like在膜上分布的分子基础提供理论数据。采用免疫磁珠沉淀的方法纯化猪红细胞CR1-like,利用还原性SDS-PAGE电泳及Western-blot试验,得出猪红细胞CR1-like的分子大小;利用质谱技术对纯化的CR1-like免疫沉淀复合物进行鉴定,并对质谱数据进...
为研究减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统介导Apoptin的特性,将Apoptin基因克隆入载体pYA3493-SopE,构建重组载体pYA3493-SopE-Apoptin,然后将其电转化至减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344,对该重组菌生长特性、生化特性、毒力和表达等特性进行分析;同时将重组菌体外感染B16F10黑色素瘤细胞,分析其介导Apoptin对B16F10的作用。PCR、酶切检测表明,携带...
为探究内蒙古通辽市某牛场牛猝死的原因,本研究采集病死牛肠道内容物,分别进行革兰染色镜检、全自动微生物分析系统检测、16S rRNA基因扩增、毒力基因检测及系统进化树分析、动物致病性试验、半数致死量试验。结果显示,分离菌形态、生化特性符合产气荚膜梭菌的特性;16S rRNA基因序列与GenBank中已登录的产气荚膜梭菌的同源性为99%,系统进化树分...
为了探讨高温条件对猪睾丸支持细胞(stertoli cells)免疫豁免相关基因的影响,笔者分离培养猪原代sertoli细胞,利用差速贴壁法进行纯化,经sertoli细胞标记基因核酸与蛋白的检测鉴定,分离的原代sertoli细胞倍增时间为27.5 h。对原代sertoli细胞分别进行40℃与43℃热应激处理,并给予不同的热处理时间(0.25、1、6 h)与热应激恢复时间(0.5、1、2 h)处...
当前,随着病原菌抗生素耐药性不断增强,开发防控病原菌的新方法是全球面临的主要挑战之一。许多重要的动物病原菌通过"群体感应"作用来调控病原菌毒力。因此,对病原菌的群体感应进行干扰即"群体淬灭",从而开发控制疾病的新疗法已经成为新兴的研究热点。本文综述了病原菌群体感应,群体感应对病原菌致病性和肠道健康影响,以及利用群体淬灭开发药物...
本研究旨在探究单增李斯特菌10403s TatD-like DNase蛋白的序列结构特征与原核表达重组蛋白的核酸酶活性。应用生物信息学软件预测分析蛋白序列结构特征,构建重组原核表达质粒pET-32a-TatDlike DNase,转化入大肠杆菌Rosetta。重组蛋白经IPTG诱导表达、亲和层析纯化、透析复性后进行核酸酶活性分析。结果显示,单增李斯特菌10403s TatD-like DNase...
在禽源疾病发生发展过程中,趋化因子CCL4的作用尚不清楚。对克隆的禽源CCL4基因序列分析显示,其ORF包含270个碱基,编码90个氨基酸,与GenBank中登录的禽源CCL4序列完全一致;利用原核表达载体pET30a对CCL4的成熟肽部分进行表达,IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳,结果与预期一致,在约11 ku处出现明显蛋白条带。使用经镍柱纯化获得的目的蛋白免疫家兔,制...
旨在考察大鼠单剂量静注和经口染毒赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的血浆毒代动力学特征。选用16只健康雌性SD大鼠,随机分成2组,分别通过单剂量静注(i.v.)和经口(p.o.)染毒OTA(剂量为0.5 mg/kg),血液采样时间点为染毒后第0、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12和24小时,之后每24 h采样1次直到720 h。采用高效液相色谱-荧光检测法测定血浆样品...
为研究虎杖苷(PD)对热应激大鼠模型空肠消化吸收、抗氧化和肠屏障功能的影响,采用2×2设计,将24只雄性SD大鼠随机分为4组(n=6):室温处理+灌胃羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液组、室温处理+灌胃PD溶液组、热应激处理+灌胃CMC-Na溶液组、热应激处理+灌胃PD溶液组。热应激组每天40℃处理1.5 h,连续3 d。结果显示,在热处理后大鼠空肠绒毛高度、绒毛高度隐...
为探究喜树碱(CPT)对急性肺损伤(ALI)的影响。试验分为空白对照组、单加药物组、模型组、模型+药物组,以LPS诱导的RAW264.7细胞作为炎症细胞模型并收集RNA,应用荧光定量PCR检测细胞IL-6、IL-1β基因的变化水平。以鼻腔注射脂多糖(LPS)的方式构建小鼠急性肺损伤模型,12 h后收集肺组织及支气管肺泡灌洗液,应用石蜡切片技术评价肺病理组织学的变化情...
尊敬的广大作者:《中国兽医科学》为学术性期刊,设有预防兽医学、基础兽医学、临床兽医学共3个栏目。主要刊登具有较高学术水平的兽医科学研究论著和相关学术论文。1约定1.1中国农业科学院兰州兽医研究所主办的《中国兽医科学》已加入《中国学术期刊(光盘版)CAJ-CD》、《中国学术期刊(网络版)CAJ-N》。本刊主办单位中国农业科学院兰州兽医研究所...
购物车(0)