进入新世纪以来，生命科学、生物技术研究不断取得重大突破。2000年6月27日人类基因组序列“工作框架图谱”完成，被认为是开创了人类现代科技史上继原子弹、人类登月之后的第三个里程碑。
随着人类基因组计划的提前完成，干细胞技术和克隆技术发展日新月异，生物技术及其产业化进程产生了质的飞跃，生物技术应用几乎遍及人类经济生活的每个领域，生物经济初露端倪。当前，生物技术及其产业发展呈现出四大态势：
毕赤酵母是目前最优秀的外源蛋白表达系统之一。着重对重组毕赤酵母甲醇利用表型（Mut^＋型、Mut^S型和Mut^-型）、基因剂量对外源蛋白高效表达的影响机理进行综述。Mut^S型的比生长速率和蛋白产率比Mut^＋型低、发酵周期长、副产物（如乙醇、乙酸等）形成速率不同。外源基因拷贝数对外源蛋白的影响主要有三种情况：（1）高基因拷贝数对外源蛋白...
目的：利用噬菌体展示技术构建B3HM细胞免疫小鼠的脾细胞表达scFv文库。方法：用人骨髓细胞系B3HM细胞免疫小鼠,取其脾细胞采用RT-PCR方法扩增VH和Vk基因并克隆入噬菌体展示表达载体,构建scFv文库,测定文库的库容量,BstNI酶切单克隆分析文库的多样性,对文库进行富集检测,鉴定单克隆噬菌体与B3HM细胞结合反应。结果：文库的库容为5×10^6cfu,单克...
旨在构建肉毒毒素蛋白受体syt Ⅱ N端片段的原核表达载体,并在大肠杆菌pMAL-c2x系统中表达MBP-Syt融合蛋白。根据GenBank中已报道的人syt Ⅱ基因序列,截取N端氨基酸序列,依据大肠杆菌的偏爱密码子,设计引物人工合成全基因,将全长基因克隆至原核表达载体pMAL-c2x中,重组质粒转化大肠杆菌E.coli ER2566,IPTG诱导表达。表达产物经Amylose Resin亲和...
目的：建立毕赤酵母表达质粒pPICZαA-cystatin,转化酵母细胞生产重组蛋白,探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂（sv-cystatin）对肿瘤侵袭的生物学作用。方法：利用PCR扩增技术从pUC18/sv-cystatin质粒中扩增sv-cystatin cDNA并克隆至酵母表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-cystatin电激转化Pichia pastori酵母细胞GS115,经1%甲醇诱导获得稳定表...
Bcl-2家族蛋白质在线粒体途径凋亡的调控机制中起着重要的作用,p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA）是该家族的一种只含有BH3同源区域的促凋亡蛋白。为得到PUMA的BH3结构域短肽并检测其生物学活性,将人工合成的编码PUMA-BH3肽的DN段克隆到质粒pTYB2上,构建出表达PUMA-BH3-内含肽-几丁质结合域融合...
目的：研究肿瘤抑制基因人ING4（inhibitor of growth family,member4）对C6鼠胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法：将携有绿色荧光蛋白（GFP）腺病毒空载体Ad及重组腺病毒Ad-hING4-His（由本科室构建）分别感染C6细胞,RT-PCR法检测hING4的转录,Western-blotting法检测目的蛋白的表达。并观测hING4基因表达对C6胶质瘤细胞的作用,用MTT法绘制生长曲线,...
为了研究人类胰岛素B链第26位的酪氨酸对胰岛素和受体之间结合的影响,包括单独的氨基酸替换或化合物替换的不同胰岛素类似物的合成,其中化合物替代类似物的B链C末端都减少了4个氨基酸。在对它们与胰岛素受体的亲和力进行研究中发现它们与胰岛素受体的亲和力没有丢失,HisB26类似物和N-MeHisB26类似物的结合能力与胰岛素相比改变不大,分别是胰岛素...
为推进我国西部地区生命科学及生物技术的发展，促进西部地区和全国各科研院所的合作与交流，由中国生物工程学会、四川大学华西医院科技部共同主办、四川大学临床医学院/华西医院、四川大学研究生院、深圳市赛百诺基因技术有限公司协办的“生命科学与生物技术前沿研讨会”将于2007年8月25日-29日在四川大学华西医院举行。大会主题：加快知识更...
目的：以三维成团培养为培养系统,探讨bFGF与胶原对组织工程软骨体外构建的影响。方法：成团培养兔生长板软骨细胞,设bFGF、胶原及联合作用组。HE染色观察新生组织形态;免疫组化检测Ⅰ、Ⅱ型胶原表达以观察细胞表型;Hoechst33258法检测细胞DNA含量;羟脯氨酸法与阿新蓝法测定基质中胶原与蛋白多糖的合成。结果：新生软骨的组织学形态近似自然软骨...
目的：应用生化提纯技术从条斑紫菜（Porphyra yezoensis）中提取不同纯度的多糖,并观察各多糖组分对人乳腺癌细胞MCF-7生长的影响。方法：通过DEAE-52柱层析和Sephadex G-200柱层析,对条斑紫菜粗多糖热水提取物进行纯化;经HPLC,紫外和红外光谱对多糖各组分的纯度及结构进行初步鉴定;并用MTT法和流式细胞仪检测多糖对人乳腺癌细胞MCF-7生长的影...
为寻找胃癌特异的肿瘤标记物,用于胃癌临床诊断及药物治疗靶点的选择,采用荧光差异显示凝胶电泳（DIGE）技术分离并筛选Cy3、Cy5及Cy2荧光素标记的胃癌及对应癌旁组织差异表达蛋白质,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）或串联质谱技术进行鉴定并分析。结果共筛选出33个差异表达蛋白质点,其中9个蛋白质点在胃癌组织中上调,24个蛋...
将木质纤维素类生物质如玉米秸秆等用稀酸水解预处理,在半纤维素水解为单糖的同时,水解液中还会产生一些可能对后续发酵有影响的副产物。分别考查了在玉米秸秆稀酸水解液中检测出的乙酸、甲酸、香草醛、糠醛和羟甲基糠醛对重组木糖发酵菌株S.cerevisiae6508-127生长和发酵的影响。结果表明,甲酸和乙酸对菌体生长的抑制强于乙醇生成,且甲酸的抑制...
根据德国、欧盟和美国制定的生物柴油标准制定了以碘值、十六烷值和脂肪酸组成等参数作为植物油质量的评价体系。通过四条标准,即51〈十六烷值〈65、碘值〈115、亚麻酸〈12%和十八碳四烯酸〈1%、碳链长度为C12～C22,对国产118种种子含油量超过30%的木本油料植物进行评估,共筛选出53种木本油料植物的种子油可作为发展生物柴油最适合的原料。其中...
研究了在小鼠肠道菌群的高效离子交换色谱（HPLC）分析中,不同色谱分离条件对分离效果的影响,确立了最佳色谱条件：样品上样于Toyopearl TSK gel SuperQ-650c强阴离子交换树脂柱,以0.02mol/L哌嗪-HCl缓冲液（pH8.0）平衡,洗脱盐浓度为1.0mol/L NaCl,洗脱梯度为0.1～0.5mol/L NaCl线性梯度洗脱80min,再经0.5～0.75mol/L NaCl线性梯度洗脱25min,流...
大西洋马铃薯是经济价值很高的炸片型加工品种,逆境胁迫下,易产生褐变、空心等问题,影响加工品质。为获取抗逆境胁迫的优质转基因新品种,采用根癌农杆菌介导法,以大西洋马铃薯的茎段为外植体,建立了快速,简便,高效的遗传转化体系。从共培养到转化植株获得只需7 ～8周,转化频率达80%。结果表明茎段是较好的转化受体,硫代硫酸银可以有效促进不定芽...
采用RT-PCR,从Hela细胞的mRNA中扩增人sTNFR1基因,构建含有目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-c2x重组质粒亚克隆,转化入大肠杆菌,测序证实其序列与基因数据库中sTNFR1基因一致。经异丙基-β-D半乳糖苷酶（IPTG）诱导表达,淀粉树脂亲和层析法纯化,得到融合蛋白sTNFR1-MBP。结果显示：经Western-blotting检测,sTNFR1-MBP具有免疫活性;MTT检测...
运用均匀设计法对影响rPA（K）在大肠杆菌中表达的因素进行了优化设计,摸索出了对表达产物进行诱导表达的最佳优化表达条件。结果如下：溶解氧为90%,IPTG诱导时间为5.3h、IPTG终浓度为0.1mmol/L、培养基为HD、pH值为6.0、诱导温度为25℃。目的蛋白平均密度从0.16提高到0.48,是优化前的3倍。
目的：从大肠埃希氏杆菌UTI89基因组中筛选出全部潜在的分泌蛋白并进行初步研究。方法：使用SignalP3.0、TatP1.0、SecretomeP2.0等蛋白分析软件对5211个ORF进行预测;对筛选出的信号肽及分泌蛋白的基本特征进行统计学分析;使用Blast2 Sequences进行同源性分析。结果：共筛选出432个sec途径分泌蛋白,19个Tat途径分泌蛋白,386个非经典分泌蛋白;信...
微系统技术给细胞研究提供了一个全新的平台。细胞图形化（Cell patterning）技术作为全新的细胞培养方式,在细胞研究中发挥重要作用。介绍了目前应用于细胞图形化的主要技术,包括光刻（Photolithography）、软光刻（Soft lithography）、模板辅助（Stencil-assisted patterning）等方法,并阐述了细胞图形化技术在基础生物学、组织工程以及基于...
随着机械化程度的提高和交通事业的发展,周围神经损伤发生率大幅度地上升。虽然通过手术的方法可以进行端对端的缝合,但是神经恢复的效果仍然不理想,特别是存在神经短距离缺损时,神经导管可为神经的修复提供一个合适的微环境,使得神经纤维能够再生并顺利到达远端。介绍了受损神经恢复效果的评价标准,神经导管材料的研究进展,神经生长因子对神经...
随着生物制药业的迅速发展,转基因鸡输卵管生物反应器正逐渐成为人们关注的焦点,转基因鸡以其卓越的优势必将成为科学研究的热点和生物制药领域的新兴产业之一。目前,转基因鸡最成功的制备方法即逆转录病毒介导法,并已成功制备出表达标记基因的转基因鸡。综述了逆转录病毒载体制备转基因鸡的优势、方法和转基因鸡的研究进展,同时也讨论了转基因...
光、温度、水分等环境因素影响植物的生长发育,植物可以通过启动子中顺式作用元件与转录因子的相互协调作用,对这些信号产生响应,调控基因表达。综述了光、温度、水分诱导表达启动子中的顺式作用元件及相关转录因子研究的最新进展,从分子水平上探讨了环境因子诱导的基因表达调控,对研究植物适应环境的机制具有一定的意义。
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